猪场洗消效果的评估模型与应用分析

猪场消毒效果如何，需要通过洗消程序评估来判断！

　　一、洗消程序评估的价值与难点

西小程序评估价值

影响洗消效果的因素

洗消效果评估难点

洗消程序评估难点

伪狂犬病与非瘟病毒比较

　　3.平行试验设计

　　(1)通过检测筛选阳性污染场，检测阳性后开展评估实验;

　　(2)将20头份的伪狂犬疫苗毒(107.5TCID50)稀释为200毫升;

　　(3)通过刷涂和喷雾制备栏舍内栏杆、墙面和地面的污染区;

　　(4)静止2h干燥(每20头份的疫苗毒可制备10平米的污染区)

　　(5)洗消前，用拖布或棉布条对猪舍相关区域进行采样保存;

　　(6)用对非瘟有效的消毒剂和洗消程序对猪舍进行全面洗消;

　　(7)洗消后，用拖布或棉布条对猪舍相关区域进行采样保存;

　　(8)用荧光定量PCR检测方法，分别检测伪狂犬疫苗毒和ASFV。

采样前后比对

平行试验结果

　　二、以病毒感染细胞实验为基础的评估模型的建立

　　1、毒株和细胞系选择：

　　⚫ PRV分离株(SZ1602)：107.5~8.0TCID50/0.1mL;PK-15 细胞系;

　　⚫ PRRSV疫苗株(R98)：106.5~7.0TCID50/0.1mL;Marc-145细胞系;

　　2、实验基本流程：

　　病毒与消毒剂混合→感作一定时间→加入针对消毒剂的中和剂→按测定毒价的方法倍比稀释，接种细胞→观察细胞病变，与阳性对照比较毒价变化→通过PCR确认

　　3、结果判定：

　　病毒灭活率=(消毒前病毒滴度-消毒后病毒滴度)/消毒前病毒滴度*100%以病毒灭活率超过为99.99%以上做为有效的标准。

　　三、以病毒感染小鼠为基础的评估模型的建立

　　1、毒株和小鼠的选择：

　　⚫ PRV分离株(SZ1602)：107.5~8.0TCID50/0.1mL; 18~22g SPF昆明雌鼠;

　　2、攻毒模型的建立：

　　①将49只小鼠平均分为7组(6组做为攻毒组，剩余为阴性对照)

　　②将107.6 TCID50/0.1mL的伪狂犬病毒液倍比稀释为六个梯度

　　③对其中6个实验组进行攻毒，对照组注射100uL PBS缓冲液

　　注：攻毒剂量为100uL，攻毒途径为腹腔注射

　　④连续观察记录10天，计算死亡率并通过PCR确诊死亡原因

小白鼠实验数据

　　四、多维度影响因素的评估方法

　　最大稀释浓度：

　　⚫消毒剂倍比稀释后，与病毒液感作时间30min;

　　最小作用时间：

　　⚫以适当浓度稀释消毒剂，分别与病毒液感5min，10min，15min，20min，25min，加中和剂终止反应;

　　干扰物的影响：

　　⚫病毒液先与干扰物混合，再以适当浓度稀释的消毒剂与病毒液感作30min;

　　◼干扰物选择：

　　①植物油(终浓度占比20%);②牛奶(终浓度占比20%) ;③血清(终浓度占比20%);

　　◼还可以针对水质、PH值、温度等进行评价(待续)

　　三、对消毒剂评估的阶段性结果

细胞模型实验结果

　　四、消毒剂应用价值分析和总结