ASFV可通过多种途径传播，包括口腔摄入、气溶胶接触、先天性传播、通过精液传播以及通过软蜱（生物储库）传播。受感染的猪通过分泌物和排泄物（包括口腔和鼻液、血液、粪便和尿液）将病毒释放到周围环境中。鼻对鼻直接接触或吸入气溶胶中的病毒会增加病毒传播的风险。研究表明，经鼻内接种的猪会患上急性疾病，并可在猪的鼻拭子中检测到病毒。在空气接触猪的鼻拭子中可检测到病毒。这表明传染性ASFV颗粒存在于鼻粘膜中。然而，ASFV在鼻粘膜中的致病机理尚不清楚，粘膜中的ASFV发病机制仍然未知。本研究采用鼻腔外植体模型，探讨了鼻黏膜在ASFV感染中的作用。
鼻黏膜是病原体进入呼吸系统的第一道屏障。最外层是假增生的纤毛柱状上皮，其完整性和极性由细胞间连接（ICJ）精心维持。下面是固有层，这是一层疏松的结缔组织层，上面布满了腺体和免疫细胞。粘膜下层与固有层相似，但比固有层更致密，位于更深的一层。鼻腔气道的上皮细胞通常是病毒的首要目标，其次是上皮和固有层中的免疫细胞。这些受感染的免疫细胞会让病毒穿透上皮屏障，穿过固有层，最终进入血液。
在这项研究中，使用了一种模拟体内条件的呼吸道粘膜外植体模型，使用基因I型毒株E70和基因II型毒株Belgium2018/1（BEL18）来探索ASFV在鼻粘膜中的感染模式。此外，我们在Transwell上分离和培养了原代猪呼吸上皮细胞（PoRECs），以检查ASFV结合和随后病毒复制的极性。
研究结论
1、鼻黏膜三个不同区域（上皮细胞层、固有层和粘膜下层）的感染细胞的分析表明，无论病毒株如何，固有层都是ASFV复制的优先位点。非洲猪瘟病毒可能利用不同类型的细胞进入呼吸道黏膜进行复制。
2、两种非洲猪瘟病毒基因型的感染机制不同，基因型I偏爱基底侧表面，而基因型II则偏爱顶端表面。
数据分析
用不同基因型ASFV和选定的细胞标志物进行了双IF染色，并计算了上皮、固有层和粘膜下层感染细胞中细胞标志物阳性细胞的比例。
鼻外植体中ASFV感染细胞的鉴定。
A在72hpi对鼻中隔（顶部）和鼻甲（底部）外植体进行ASFVp72（绿色）与CD163（红色）组合的双IF染色。细胞核染色呈蓝色。黄色虚线表示一组感染。白色虚线表示粘膜上皮（EP）和固有层（LP）之间的边界。ASFV+CD163+细胞和ASFV+CCD163-细胞分别用白色箭头和黄色箭头表示。比例尺：50μm。B鼻外植体中ASFV感染的动力学研究。在0、24、48和72hpi的截面中，感染细胞的总数以mm2面积表示。通过双向方差分析和Tukey的多重比较事后检验来确定统计显著性。不同的字母表示时间点之间的显著差异（p<0.05）。所有数据均以三只动物的平均值±标准差（SD）表示。C通过鼻外植体中的区域的ASFV感染细胞的百分比。在鼻组织类型和基因型中，大多数感染细胞都位于固有层。EP：上皮，LP：固有层，SM：粘膜下层。
A4I-E70基因型和II-BEL基因型毒株在呼吸道上皮细胞中的差异嗜性。
E70（左）和BEL18（右）毒株在呼吸道上皮细胞中的体外感染。通过顶部、基底外侧或EGTA处理后的顶部接种细胞。在24、48和72hpi时对ASFV感染的细胞进行计数。使用双向方差分析和Tukey的多重比较事后检验分析统计学显著性。不同的字母表示不同时间点之间的显著差异（p<0.05）。数据显示为三个独立实验的平均值±SD.B感染ASFV的PoRECs的代表性IF图片。对ASFVp72（绿色）、细胞角蛋白（红色）和细胞核（蓝色）进行免疫荧光染色。图片显示呼吸道上皮细胞中E70的基底外侧感染（顶部）和BEL18的顶端侧感染（底部）持续感染72小时。使用20倍或63倍物镜拍摄图像。箭头表示受感染的细胞。在以63倍放大倍数拍摄的图像中，白色箭头表示细胞角蛋白+感染的细胞，而黄色箭头指向细胞角蛋白-感染的细胞。比例尺：50μm。
(审核编辑: 猪猪侠)
