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中农华正——苋黄正宝药敏检测的相关问题

发布时间：2018-06-26发布企业：北京中农华正兽药有限责任公司人气：7884

苋黄正宝药敏检测的相关问题

由于苋黄正宝口服液中含有大量阳离子活性成分，如各种黄连原小檗碱与麦康凯琼脂和营养琼脂的阴离子（硫酸脂多糖、海藻酸）发生正负电荷相吸，使得各种黄连原小檗碱（生物碱）失去自由扩散的能力，若使用纸片法于半固体琼脂培养基时，无法形成比纸片大的抑菌圈，造成药物敏感性假阴性（不敏感）实验误差。

建议使用液体培养基对苋黄正宝进行敏感性测试。肉汤稀释法测定苋黄正宝大肠杆菌最小抑菌浓度。

一、培养基准备

水解酪蛋白肉汤（MHB）：称取牛肉粉2.0g，酸水解酪蛋白17.5g，可溶性淀粉1.5g，溶于1L蒸馏水中，121℃高压灭菌15min，4℃保存备用。

二、实验耗材

无菌试管，1ml无菌移液枪头。

三、实验步骤

1、培养基及苋黄正宝稀释液：取13支无菌试管，其中三支分别标记肉汤对照，待测大肠杆菌生长对照，质控菌生长对照。剩余10支分别标记，1～10号。用MHB肉汤稀释苋黄正宝至待测最高浓度（五百分之一）。像编号2～10号试管中分别加入2mlMH肉汤，然后转向1号试管中加入4ml稀释好的苋黄正宝，然后从中去除2ml加入到2号试管中混匀，取2ml加入到3号试管中，依次进行倍比稀释至10号管后弃去2ml。质控菌按照同样操作进行。

2、待测菌和质控标准菌准备：用MH肉汤稀释菌液为107CFU/ml。

3、菌液接种：从低浓度苋黄正宝试管向高浓度苋黄正宝试管依次加入0.1ml菌液，使菌液终浓度为5×105CFU/ml。加样时尽量避免移液枪头与试管壁接触。

4、结果判断：37℃培养18—24h后，完全抑制待测菌有肉眼可见生长的最低苋黄浓度即为苋黄对待测菌的MIC。

质控菌株：金黄色葡萄球菌ATCC29213；大肠杆菌ATCC25922；肠球菌ATCC29212；铜绿假单细胞ATCC27853。